菌种保藏技术(菌种保藏技术)

菌种保藏是运用物理、生物手段让菌种处于完全休眠状态,使在长时间储存后仍能保持菌种原有生物特性和生命力的菌种储存的措施。

概况

菌种在生命活动、菌种繁育时,由于受外界不良条件、病毒的伤害,往往会发生退化。如长期高温会使菌丝生命力降低;传代次数增加,会使某些细胞器减少甚至丢失;接种时菌种常会受到消毒药剂和火焰高温的伤害而发生退化;接种挑选菌种时可能在无意中造成某一形态的菌丝比例多,而另一形态的菌丝减少;长期传代,繁殖菌种很可能被病毒侵染。如此种种情况,都会使菌种发生退化。保种可降低发生变异的频率。保种另一层意义是,保藏某一菌种的某些特殊遗传性状(遗传基因),这此性状对生产可能无经济使用价值,但以后或才可作为育种材料。

菌种保藏是通过降低基质含水量、降低培养基营养成分、或利用低温或降低氧分压的方法掏食药用菌的呼吸、生长,掏其新陈代谢,使其处于半休眠状态或全体眠状态,以显著延缓期菌种衰老速度,降低发生变异的机会,从而使菌种保持良好的遗传特性和生理状态。

保藏方式

营养体菌丝体保藏的菌种,营养生长不能很旺盛,生长速度不能非常快,培养基营养成分丰富,温度较高,生长速度快的菌种,衰老速度也快,衰老的菌丝作菌种保藏时,保藏后菌丝复活程度较差,生长势也不好,菌种容易退化。营养体保藏的菌种,培养基营养成分应略贫乏,含水量和培养温度应稍低些,这样,菌丝生长速度较慢,生长势也不会太旺盛,菌丝衰老速度也慢。

斜面菌种低温保藏

培养基:一般菌种用PDA培养基。葡萄糖18g,马铃薯(去皮)200g ,琼脂20g ,水1000ml,PH自然。特殊菌种用特殊培养基。

接种:接种保藏菌种用的菌种,菌丝应健壮。用前端的菌丝作接种材料。接种时要防止火焰高温、消毒药液对菌种的伤害。

培养:应以适宜温度或略低于最快生长温度的温度培养。蘑菇、香菇菌种应在22度左右温度培养,灵芝等高温菌种应在25度左右温度培养,培养时试管表面用8层厚的纱布或薄棉被覆盖,避光。

保藏菌种质量要求:菌丝生长整齐,菌丝长到培养基面积2/3时。

保藏方法:用牛皮纸或硫酸纸将试管棉花塞包好,放在清洁的小木盒中。木盒上注明菌种的名称、菌名、保存日期、经手人姓名,再放在4度中保藏。保藏菌种的冰箱不要经常开启,保持温度稳定。

斜面菌种液体石蜡油保藏

石蜡没保藏是用灭菌并除去水分的液体石蜡油灌入母种试管中,使菌体与空气隔绝,以降低其生命活动水平,并阻止水分散失的方法来保藏。石蜡油保藏,油层下氧含量低,菌丝呼吸水平极低,培养基营养消耗速度极慢,菌种不易老化、退化,可较长时间保藏。

石蜡油保存分石蜡油灭菌、脱水处理、灌石蜡油、封口等几个步骤。

基质培养基菌种的保藏

基质培养基保存是用原种、生产种的培养基保存菌种。基质培养中有丰富的迟效性养分,菌丝会分解培养基中复杂养分边利用生长。

培养基本方与正常原种相同,但培养料应稍坚实。培养料的含水量应比生产用培养料含水量低2%左右。培养基较坚实,含水量较低,可降低菌丝生长速率,降低培养基中空气含量、降低呼吸强度,从而延缓衰老。

蒸馏水保存

蒸馏水保存菌种的原理目前还不清楚,可能是食用菌菌丝细胞壁较坚牢,游离水不能大量进入菌丝细胞内;蒸馏水中无营养成分,因此菌丝新陈代谢极慢,从而延缓衰老。

蒸馏水也可用斜面菌种保存。保藏时,在超净台中,用接种钩、接种铲将斜面菌种切割成米粒大小,然后把米粒大小的斜面菌种称许在蒸馏水保藏管中,每管放7–8粒菌种,其余操作方法和液体菌球相同保藏。

液氮超低温保存

液氮内的温度为-196度,在-136度——-196度下,食药用菌菌丝生长、呼吸、新陈代谢处于完全停止状态,菌丝不会衰老,从而能使菌种保存很长时间而不退化。液氮超低温保藏菌种,需要有液氮罐、菌种保存管和保存液。常用PDA培养基菌种或麦粒培养菌种。保存容器可用冻存管或安瓿管。保种程序:(1)培养菌种(2)菌种中加入保存液(3)预冷(4)放入液氮罐

营养液保藏法

营养液配制:马铃薯汗约900ml,葡萄糖16g,磷酸二氢钾0.3g,硫酸镁0.15g,最后补加蒸馏水使总容积到1000ml。每一12mm×16mm的试管中灌入营养液5ml,用棉塞塞管口,在111kPa蒸汽压下灭菌40分钟。冷却后,在超净台中移入待保存的菌种,菌种在移入前,先用接种钩将其分割成绿豆粒大小,每管移入7–8粒,同时用灭菌过的软木塞或橡皮塞更换棉塞,然后放入4度左右冰箱中保存。保存期间菌丝还会微量生长,可在液面形成菌膜,并向管壁上方生长,一般可保存2–3年。

生理盐水保藏法

先在试管中加入生理盐水,用棉塞塞住管口,在152kPa蒸汽压下灭菌40分种。冷却后,在无菌箱中,将斜面菌种切割成绿豆粒大小,并移置灭过菌的生理盐水管中,每管放7–8粒。菌种放入生理盐水管中,每管放7–8粒。菌种放入生理盐水管中后,用灭过菌的软木塞或橡皮塞塞好管口,再放入4度左右冰箱中。该法可保存1年左右。

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